【引言】
在癌症早期诊断、无创产前检测和疾病监测等领域,循环游离DNA(cfDNA)因其非侵入性和高信息量而备受关注。然而,cfDNA在血液中含量极低,且片段较小(通常为150-200 bp),这使得其提取富集成为一项技术挑战。传统的柱提法虽较常用,但在高通量应用和自动化处理上仍存在局限性。
Omega Bio-tek推出磁珠法游离DNA提取试剂盒(Cat #M3298 Mag-Bind® cfDNA Kit),其高效、灵活及低基因组污染的特点为科研和临床检测提供了全新的解决方案。
磁珠法游离DNA提取试剂盒 #M3298
【技术优势】
磁珠法核酸提取技术因其操作简便、高通量和自动化兼容性而成为cfDNA提取的理想选择。Omega Bio-tek的磁珠法游离DNA提取试剂盒通过独特的磁珠和缓冲液配方,实现了重大突破:
1.高捕获率High Yield and Quality
从1毫升血清中纯化的DNA的电泳图。实验中,将细菌DNA片段加入血清样本,并使用Omega Bio-tek的Mag-Bind cfDNA试剂盒和竞品柱法试剂盒进行分离。使用16s细菌特异性引物,在1倍和10倍稀释度下进行了实时PCR检测。DNA产物于Agilent TapeStation®2200上进行分析。结果显示,Omega试剂盒能够有效捕获循环无细胞DNA,且未检出基因组DNA污染。
特有的短片段回收方案可效捕获低至50bp的cfDNA,尤其适用于肿瘤DNA(ctDNA)的富集与检测。
使用KAPA Biosystems的HyperPrep试剂盒 进行NGS建库,分别使用Omega和竞品试剂盒提取cfDNA。为排除基因组DNA对浓度的干扰,采用TapeStation®2200对100-300bp区域进行DNA浓度测定。Omega试剂盒浓度为45.2 pg/μL,显著高于竞品25.1 pg/μL。
2.低基因组污染Little Genomic Carryover
独特的结合系统选择性吸附小片段DNA,大幅减少基因组DNA的污染。
3.自动化兼容
试剂盒支持手动提取、多款开放性自动化提取平台(如MagBinder® Fit24)两种提取方式,2-4mL血清/血浆样本可直接上机纯化,真正实现样品进产物出,直接洗脱至单独离心管,省却产物转移步骤,显著提升提取效率。
Omega MagBinder®Fit24核酸提取仪
上机试剂装填位置示意图
【适用场景】
1.短片段富集:通过调整缓冲液(如添加JSB Buffer或异丙醇),可选择性提取50 bp或75 bp的短片段,适用于ctDNA研究。
2.大体积样本:支持1-10 mL血浆/血清输入,最低洗脱体积50 μL,满足低浓度样本需求。
3.自动化整合:与MagBinder® Fit24平台联用,实现从样本到DNA的全自动化处理,减少人为误差。
4.适用样本:1-10mL血浆、血清。
5.下游应用:qPCR、NGS、ddPCR。
【案例分析】
ddPCR检测低频突变:
在一项应用中,Omega提取的cfDNA通过ddPCR成功检测到0.1%的NRAS和EGFR低频突变,展现了其在肿瘤液体活检中的高灵敏度。此外,提取效率高达60-70%,远超同类产品的30%。
可视化NRAS检测的阳性与阴性群体,阈值如图红色水平线所示
NRAS基因等位基因频率与预期值的一致性分析,NRAS突变等位基因比率符合预期。
可视化EGFR检测的阳性与阴性群体,阈值如图红色水平线所示
EGFR基因等位基因频率与预期值的一致性分析,NRAS突变等位基因比率符合预期。
【订购信息】
磁珠法游离DNA提取试剂盒(Cat #M3298 Mag-Bind® cfDNA Kit)凭借磁珠法的高效性和灵活性,为cfDNA研究提供了可靠的工具。无论是短片段富集、高通量自动化,还是低频突变检测,该试剂盒均展现出卓越性能。
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